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金黄色葡萄球菌高通量快速检测技术
2017年08月31日  

技术概述:高通量快速检测技术是指一次可快速检测多个样品或对同一样品进行多种检测的技术。微生物的常规检测方法是培养法,基本过程是首先培养和分离微生物,然后再进行生化鉴定,有时还需要进行血清学鉴别,整个过程通常需要3~7天时间,甚至更长的时间,其检验结果准确可靠,但费时费力。金黄色葡萄球菌纸片法将传统方法中需要多次实验才能完成的任务一次完成,并在15小时~24小时内获得结果,从而大大节约样品分析时间。

增产增效情况:农产品、食品快速检测技术,作为其质量安全监管的重要手段,对及时开展监测、了解我区酥油、糌粑、糕点、生熟食品等微生物污染状况具有重要意义。通过监管手段的更新,为监督和保障食品卫生提供技术支撑,有效促进食源性疾病的及时发现和防控,将产生巨大社会经济效益。

技术要点:

1、操作方法

(1)样品处理:取样品25毫升(克)放入含有225毫升灭菌磷酸盐缓冲液或生理盐水的取样罐或均质杯内,制成1:10的样品匀液,调节样品匀液pH至6.0~8.0。用1毫升灭菌吸管吸取1:10样品匀液1毫升,注入含有9毫升稀释液的试管内,振摇后成为1:100的样品匀液,以此类推,每次换一支吸管。

(2)接种:一般食品选2~3个稀释度进行检测,将金黄色葡萄球菌测试片(BT206)置于平坦实验台面,揭开上层膜,用无菌吸管吸取1毫升样品匀液慢慢均匀地滴加到纸片上,然后再将上层膜缓慢盖下,静置10秒左右,使培养基凝固,每个稀释度接种两片。做一片空白阴性对照。

(3)培养:将测试片叠在一起放回原自封袋中并封口,透明面朝上水平置于恒温培养箱内,堆叠片数不超过12片。培养温度为36℃±1℃,培养15 小时~24小时。

2、结果判读:培养后,测试片上紫红色的菌落为金黄色葡萄球菌;呈蓝色的菌落为其他大肠菌群。出现阳性菌落的样本,最好用其他更为可靠的方法进行验证,没有条件的至少要再取样重复检验一次。

3、计数原则及报告方式

(1)选择菌落数在20~200个之间的纸片进行计数。

(2)若两个稀释度的菌落数均在20~200之间,则取其平均菌落数乘以稀释倍数,即为每毫升(或每克)样品中金黄色葡萄球菌数。

(3)如果所有稀释度的测试片上的菌落数都小于20,则计数稀释度最低的测试片上的平均菌落数乘以稀释倍数报告之;如果所有稀释度的测试片上均无菌落生长,则以小于1乘以最低稀释倍数报告之。

(4)如果所有稀释度的菌落数都大于200,计数最高稀释度的测试片上的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。计数菌落数大于200的测试片时,也可计数一个或两个具有代表性的方格内的菌落数,换算成单个方格内的菌落数后乘以20(滤纸区面积为20平方厘米),即为测试片上估算的菌落数。报告单位以CFU/毫升(或CFU/克)表示。

适宜区域:适宜全区各地。

技术依托单位:西藏自治区农牧科学院质量标准与检测研究所

通讯地址:西藏拉萨市金株西路149号区农科院质标所(综合实验楼)

邮政编码:850032

联系人:李颖 达瓦卓玛

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